xCELLigence®实时细胞分析（RTCA）MP仪器使用无创电阻抗监测，以实时无标记(ji)的方(fang)式量(liang)化(hua)细胞(bao)增(zeng)殖，细胞(bao)形态变化(hua)和附着质量(liang)。 MP与其他xCELLigence®仪器不(bu)同，它可以容纳6个96孔(kong)实时微电子(zi)检测板（E-Plate®96）。这六个(ge)(ge)板可以同(tong)时控(kong)制和监控(kong)，但(dan)彼此独立，可为多个(ge)(ge)用户提供(gong)最(zui)大的通量(liang)。将MP仪(yi)器置于标准的CO2细胞培养箱中，并(bing)(bing)通过电线(xian)与分析(xi)和控(kong)制(zhi)单元(yuan)接触，并(bing)(bing)将其放置在培养箱外。友好的用户软件允许对仪器进(jin)行(xing)实时(shi)控(kong)制(zhi)和监控(kong)，并(bing)(bing)包括实时(shi)数据进(jin)行(xing)显(xian)示和分析(xi)。 消(xiao)除了(le)传统终点法的基于细(xi)胞的测定的时(shi)间和(he)劳动(dong)密集型步骤，xCELLigence RTCA MP的实时细胞分析大(da)大(da)提高了效率和总(zong)体通量。通过消除对标记/染料的(de)(de)需要，获得的(de)(de)最(zui)大的(de)(de)相关数(shu)据。。

_{图1.细胞(bao)阻抗装置(zhi)概(gai)述在(zai)单元格添加之(zhi)前和之(zhi)后显(xian)示单个孔的侧(ce)视图。电(dian)极和电(dian)池(chi)都不(bu)被(bei)(bei)拉伸（为了清晰起见，它(ta)们被(bei)(bei)放大）。在(zai)不(bu)存在(zai)电(dian)池(chi)的情况下，电(dian)流(liu)自由流(liu)动通过培养基，完成电(dian)极之(zhi)间的电(dian)路。由于细胞(bao)在(zai)电(dian)极上粘附(fu)并(bing)增殖(zhi)，电(dian)流(liu)流(liu)动受阻，提供了细胞(bao)数(shu)量，细胞(bao)大小/形(xing)态以及细胞(bao) - 基质(zhi)附着质(zhi)量的非常灵敏(min)的读数(shu)。}

细胞阻抗说明

在细胞生物(wu)化学测(ce)定(ding)和(he)全身生物(wu)体内(nei)实验之间定(ding)位，基(ji)于(yu)细胞的(de)(de)测(ce)定(ding)是基(ji)础和(he)应用(yong)生物(wu)学研究不可缺(que)少的(de)(de)工具。然而，许多基(ji)于(yu)细胞的(de)(de)测(ce)定(ding)法的(de)(de)作用(yong)通(tong)过(guo)以下方式被(bei)减(jian)少：（1）需要(yao)使(shi)用标(biao)记；（2）与连续监测不相容（即仅(jin)产生终点数据(ju)）；（3）与正交(jiao)试验不相容(rong)；（ 4）无法提供(gong)客观(guan)/定(ding)量(liang)的(de)(de)读数。然而，这些(xie)缺点都(dou)是通(tong)过非侵(qin)入性的(de)(de)，无(wu)标记的(de)(de)和实时的(de)(de)细胞阻抗测定(ding)来克服(fu)的(de)(de)。 细胞(bao)阻(zu)抗测定(ding)(ding)的功能单元(yuan)是融(rong)合到(dao)微量滴定(ding)(ding)板孔的底部表面的一组金微电极（图(tu)1）。当浸没(mei)在导电(dian)溶液（如缓冲(chong)液或标准组织培养基）中时(shi)，在这些电(dian)极(ji)上施加电(dian)位(wei)会使电(dian)子(zi)离开负(fu)极(ji)，通过本体(ti)溶液，然后沉积到正极(ji)端以完成电(dian)路。因(yin)为这种现象(xiang)取决于电(dian)极(ji)与(yu)本体(ti)溶液相互作(zuo)用(yong)，所以在电(dian)极(ji) - 溶液界面处的粘附细胞(bao)的存在(zai)阻(zu)碍了(le)电子流(liu)动。该阻(zu)抗的大小(xiao)取(qu)决于细胞(bao)的数量，细胞(bao)的大小(xiao)和形状以及细胞(bao) - 基底附着质量。重要的(de)是，金微电极表面和施加的(de)电位（22 mV）都不(bu)影响细胞的(de)健康或行为(wei)。

阻抗电极(ji)

ACEA的实时(shi)微(wei)电(dian)子检测板—E-Plate板每孔(kong)中的金微电极生物(wu)传感器覆盖70-80％的表(biao)面积（取(qu)决于(yu)是否存(cun)在视野区域）。而不是图(tu)1所示的(de)简化的(de)电(dian)极对，每个孔(kong)中的(de)电(dian)极被连接成形成交错阵列的(de)“线”（图(tu)2）。这种布(bu)置可以同时(shi)监测细胞群体，从而(er)提供精确(que)的(de)灵敏度：附(fu)着于板的(de)细胞数，细胞的(de)大(da)小/形态以及细胞 - 基质附着(zhe)质量。

_{图(tu)2. ACEA实时微(wei)电子检(jian)测板}— _{E-Plate板上的(de)阻(zu)抗电极。 （A）实(shi)时微电子(zi)检测板的每个孔中使用的叉指电极(ji)的简化(hua)示意图。电极(ji)没有(you)按(an)比例绘(hui)制(zhi)（仅显(xian)示一些电极(ji)，为了清(qing)晰起见(jian)，它们已被放大）。虽然细(xi)胞也可以在(zai)金电极(ji)表(biao)面上可视(shi)化(hua)，但在(zai)中间(jian)的无电极(ji)区域有(you)助(zhu)于显(xian)微成像（亮(liang)场，荧光等）。（B）16孔(kong)E-Plate板(ban)中单(dan)井的照片。（C）放大(da)阴(yin)影电极和未(wei)染色(se)人体细胞的(de)明场(chang)图像(xiang)。（D）复(fu)合(he)显(xian)微镜中观(guan)察到的金电(dian)极和结(jie)晶(jing)紫染(ran)色的人(ren)细(xi)胞。}

实时阻力(li)跟踪说(shuo)明

使用称为细胞指数(shu)（CI）的(de)无单位(wei)参数报告了由贴壁细胞引起的(de)电子流的(de)阻抗(kang)，其中CI=(时间(jian)点n阻抗-不存(cun)在细胞时阻(zu)抗）/标称阻抗值。图3提供(gong)了在建立和(he)运(yun)行凋(diao)亡实(shi)验过程(cheng)中实(shi)时(shi)阻抗曲线的(de)(de)通用示例。在细胞(bao)(bao)添(tian)加(jia)到孔中的(de)(de)头几个小时(shi)之后(hou)，阻抗快速增(zeng)加(jia)。这是由(you)于悬浮液中的(de)(de)细胞(bao)(bao)脱落，沉积在电(dian)极(ji)上并形成局部粘连(lian)。如果添(tian)加(jia)的(de)(de)细胞(bao)(bao)的(de)(de)初始数量低，并且在井(jing)底(di)上存在空(kong)的(de)(de)空(kong)间(jian)，则细胞(bao)(bao)将增(zeng)殖，导(dao)致CI逐渐但稳定增加(jia)。当(dang)细胞(bao)达到汇合CI值时(shi)，反(fan)映了大(da)容(rong)量(liang)介质可(ke)接近的电(dian)极(ji)表面积不再(zai)改变(bian)的事(shi)实(shi)。此时(shi)加(jia)入细胞凋(diao)亡诱导剂导致CI降低至零(ling)。虽然(ran)这个通用实例涉及细(xi)(xi)胞(bao)(bao)融合时的(de)(de)药(yao)物添加，基于阻(zu)抗的(de)(de)测(ce)定是非常灵活(huo)的(de)(de)，并(bing)且还(hai)可以评估初始细(xi)(xi)胞(bao)(bao)粘附到(dao)电极的(de)(de)速(su)率和(he)程度(du)，或细(xi)(xi)胞(bao)(bao)增(zeng)殖(zhi)的(de)(de)速(su)率和(he)程度(du)。

_{图3.用于建(jian)立和运行凋亡测(ce)定的通用实时阻抗曲线。 在文(wen)中解释了阻(zu)抗(kang)曲(qu)线的每(mei)个(ge)阶(jie)段(duan)及其产生的蜂窝行为(wei)。}

上述(shu)通用示例，图4显示了(le)使(shi)用ACEA的xCELLigence实时单元分析（RTCA）仪器中的E-Plate板中(zhong)采集的实际(ji)实时阻抗数(shu)据。 图4A显示将A549细(xi)胞添(tian)加到E-Plate板后的头两(liang)个小时的阻抗曲(qu)线(xian)，其(qi)中孔(kong)预先用(yong)不同浓度(du)的胶原IV包(bao)被。 虽然图4B显示了在将HeLa细胞(bao)暴露于GPCR激动剂多(duo)巴胺(an)的(de)最初几分钟内(nei)发(fa)生的(de)细胞指数的(de)变(bian)化，图4C评估了(le)在20小时内(nei)NK细(xi)胞(bao)介导的癌细(xi)胞(bao)的细(xi)胞(bao)溶解。 图4D突(tu)出(chu)显示根据药物的作用机(ji)制可能在细胞指数中发生的变(bian)化(hua)。

_{图4.使(shi)用E-Plate和xCELLigence RTCA仪器获得的(de)实时阻(zu)抗曲(qu)线的(de)示例。 （A）实(shi)时监测已经(jing)预先涂覆不同浓度胶原(yuan)IV的E-Plate孔的A549细(xi)胞(bao)(bao)粘附。请注意阻抗值（细(xi)胞(bao)(bao)指数(shu)）与显(xian)微镜中可见的贴(tie)壁细(xi)胞(bao)(bao)数(shu)之间的相关(guan)性(xing)。 （B）暴露于不同浓度GPCR激动剂(ji)多巴胺的(de)HeLa细胞的实时(shi)阻(zu)抗曲线(xian)。黑色箭(jian)头(tou)表示(shi)多巴(ba)胺(an)加入的时(shi)间。 （C）用于NK细胞(bao)介导的MCF7乳(ru)腺癌细胞溶解的实时阻(zu)抗曲线。 （D）暴露于药物的A549细胞的实(shi)时阻抗曲线显(xian)示各种作用(yong)机(ji)制。}

与细(xi)胞相关的(de)抵抗力

RTCA提供细胞数量，增殖率，细胞大小/形状和细胞 - 底物(wu)(wu)附着质量的定量读数。由于这些物(wu)(wu)理性(xing)质是数千种不同(tong)基因/蛋白质的产物，因(yin)此RTCA可以为细胞(bao)健(jian)康和行(xing)为提供非常(chang)广(guang)泛的视野。在xCELLigence仪器上已(yi)经成功地分(fen)析(xi)了从内皮屏障功能(neng)和趋化性到丝(si)状伪足动力学和免疫细(xi)胞介导(dao)的(de)(de)细(xi)胞溶(rong)解的(de)(de)一(yi)切。尽管它们的(de)(de)广(guang)泛(fan)性，xCELLigence测定仍然能够询(xun)问非常(chang)具体(ti)的生化(hua)和(he)细胞现(xian)象(xiang)。适当(dang)使用(yong)对照(zhao)和(he)/或正交技术使得可以将阻抗迹线的(de)特征与特定的(de)细(xi)胞/分子现(xian)象相关联。要了解(jie)如何做到(dao)这(zhei)一(yi)点，并(bing)且看到(dao)xCELLigence RTCA技术的敏感性(xing)(xing)和多功(gong)能性(xing)(xing)，请仔细阅(yue)读这(zhei)里突(tu)出显示的许多具(ju)体应用