3*16孔 实时无标记细胞分析仪

xCELLigence RTCA TP实时无标记细(xi)胞(bao)(bao)分析仪可以实现对各(ge)种(zhong)贴壁细(xi)胞(bao)(bao)的(de)检(jian)(jian)(jian)测(ce)，主(zhu)要包括细(xi)胞(bao)(bao)增殖检(jian)(jian)(jian)测(ce)、各(ge)种(zhong)化合物(wu)对细(xi)胞(bao)(bao)的(de)毒性检(jian)(jian)(jian)测(ce)、细(xi)胞(bao)(bao)间(jian)共培(pei)养检(jian)(jian)(jian)测(ce)、细(xi)胞(bao)(bao)粘附和伸展检(jian)(jian)(jian)测(ce)、受(shou)体(ti)介导的(de)信(xin)号(hao)通路(lu)检(jian)(jian)(jian)测(ce)等。RTCA TP系统的(de)动态(tai)监测(ce)保证了细胞的(de)瞬时响应及长时效应的(de)获(huo)取。

xCELLigenceRTCA TP实(shi)时无标(biao)记细胞分析(xi)仪具有超越传统方(fang)法(fa)的高检(jian)测灵(ling)敏性(xing)和预测性(xing)，实(shi)时数据采集(ji)特性(xing)，为研究(jiu)者提供更高质(zhi)量(liang)的数据。 本(ben)系统可支持多达3位用户同步执行(xing)细胞检测分(fen)析实验，且可同时使用E-Plate检(jian)测板，可扩展应用于细(xi)胞治疗(liao)杀伤(shang)质控(kong)、环境(jing)毒(du)理(li)、食品毒(du)理(li)评(ping)价等研究领域。实(shi)验(yan)时(shi)(shi)，将(jiang)实(shi)时(shi)(shi)细(xi)胞分析仪置(zhi)于CO2培(pei)养箱内，在(zai)分析软件的控制下，可对3块(kuai)E-plate 16独立进行(xing)同步阻(zu)抗检(jian)测，并将结果发送(song)给实(shi)时细(xi)胞分(fen)析系统工作台，由实(shi)时细(xi)胞检(jian)测分(fen)析软件进行(xing)处(chu)理(li)、显(xian)示(shi)、分(fen)析。

_{图1.细(xi)(xi)胞阻(zu)抗(kang)装置概述在(zai)单元格添加之(zhi)(zhi)前(qian)和之(zhi)(zhi)后显示单个孔的(de)侧视图。电极和电池都(dou)不被拉(la)伸（为了清晰起见，它们(men)被放(fang)大）。在(zai)不存在(zai)电池的(de)情况下，电流自由(you)流动通过培养基，完成电极之(zhi)(zhi)间(jian)的(de)电路。由(you)于细(xi)(xi)胞在(zai)电极上粘附并增殖，电流流动受阻(zu)，提供了细(xi)(xi)胞数量，细(xi)(xi)胞大小/形(xing)态以及(ji)细胞 - 基质(zhi)附着质(zhi)量的非常灵敏的读(du)数。}

细胞阻(zu)抗说明

在细胞生物(wu)化(hua)学测(ce)(ce)定(ding)和全(quan)身生物(wu)体内实验之间(jian)定(ding)位，基于细胞的测(ce)(ce)定(ding)是基础和应用生物(wu)学研究不可(ke)缺(que)少(shao)的工(gong)具。然而，许多基于细胞的测(ce)(ce)定(ding)法的作用通(tong)过以下方式(shi)被减少(shao)：（1）需要使用标(biao)记；（2）与连续监(jian)测不相容（即仅产生终点数据）；（3）与正(zheng)交试验不(bu)相容；（ 4）无法提供(gong)客观/定量的(de)(de)读(du)数。然而(er)，这些缺(que)点都是通过非侵(qin)入(ru)性的(de)(de)，无标记的(de)(de)和实(shi)时的(de)(de)细(xi)胞阻抗测定来克服(fu)的(de)(de)。 细胞(bao)阻抗测定的功能单(dan)元是融(rong)合到微量滴定板孔的底部表面的一组(zu)金微电极（图(tu)1）。当浸没在导电(dian)溶液(ye)（如缓冲液(ye)或标准(zhun)组织(zhi)培养基）中时，在这些电(dian)极上施加电(dian)位会(hui)使电(dian)子离开(kai)负(fu)极，通(tong)过本(ben)体溶液(ye)，然后(hou)沉积到(dao)正极端(duan)以完成(cheng)电(dian)路。因为这种现象取决于电(dian)极与本(ben)体溶液(ye)相互作用(yong)，所以在电(dian)极 - 溶液界(jie)面处的(de)粘附细(xi)胞(bao)(bao)的(de)存在阻碍了电(dian)子流动。该阻抗的(de)大小取决于细(xi)胞(bao)(bao)的(de)数量，细(xi)胞(bao)(bao)的(de)大小和形状以及细(xi)胞(bao)(bao) - 基底附着质量。重要的是，金微(wei)电极表(biao)面和(he)施加的电位（22 mV）都不影响细胞的健康或(huo)行(xing)为。

阻抗电(dian)极(ji)

ACEA的实时微电子检测(ce)板—E-Plate板每孔(kong)中的金微电极生物传感(gan)器覆(fu)盖70-80％的表面积（取决于(yu)是否存在视野(ye)区(qu)域(yu)）。而不是图1所(suo)示的(de)(de)简化的(de)(de)电(dian)极对，每(mei)个(ge)孔中的(de)(de)电(dian)极被(bei)连接成形成交错阵列(lie)的(de)(de)“线”（图2）。这(zhei)种布置(zhi)可(ke)以同时监(jian)测细胞群体(ti)，从而提供精确(que)的灵敏度：附着于(yu)板的细胞数，细胞的大(da)小/形态以及细胞 - 基质(zhi)附着质(zhi)量。

_{图2. ACEA实时(shi)微电子检测板(ban)}— _{E-Plate板上的(de)阻抗电极。 （A）实时(shi)微电(dian)(dian)子检测板的每个孔中(zhong)使用的叉指(zhi)电(dian)(dian)极的简化示意图。电(dian)(dian)极没有按比例绘制（仅(jin)显示一(yi)些电(dian)(dian)极，为(wei)了清(qing)晰起(qi)见，它们已(yi)被(bei)放(fang)大）。虽(sui)然细胞也(ye)可以在金电(dian)(dian)极表面(mian)上(shang)可视化，但在中(zhong)间的无(wu)电(dian)(dian)极区(qu)域有助于显微成像（亮(liang)场，荧光(guang)等）。（B）16孔E-Plate板中单井的照片。（C）放大阴影电极和未染色人体细胞的明(ming)场图像。（D）复合显微镜中(zhong)观察到的金(jin)电极和结(jie)晶紫(zi)染色的人细(xi)胞。}

实时阻力跟踪说明(ming)

使(shi)用称为细(xi)胞指数（CI）的(de)无单位参(can)数报告了由贴壁细胞引起的(de)电子流的(de)阻抗(kang)，其中(zhong)CI=(时(shi)间点n阻抗-不存在(zai)细胞(bao)时阻抗）/标称(cheng)阻(zu)抗(kang)值。图3提供(gong)了在(zai)(zai)建立和运行凋亡实(shi)验过程(cheng)中实(shi)时(shi)阻抗曲线(xian)的(de)通(tong)用示例。在(zai)(zai)细(xi)胞(bao)添加(jia)到孔中的(de)头几个(ge)小时(shi)之后，阻抗快速(su)增(zeng)加(jia)。这是(shi)由于悬浮液中的(de)细(xi)胞(bao)脱落，沉积在(zai)(zai)电极(ji)上(shang)并形成局部粘连(lian)。如果添加(jia)的(de)细(xi)胞(bao)的(de)初始数量低，并且在(zai)(zai)井底(di)上(shang)存(cun)在(zai)(zai)空的(de)空间(jian)，则细(xi)胞(bao)将增(zeng)殖，导致CI逐渐但(dan)稳定(ding)增加。当细胞(bao)达到汇合CI值(zhi)时(shi)(shi)，反映了大容量介质可接近的电极表面(mian)积不再改变的事实(shi)。此时(shi)(shi)加入细(xi)胞(bao)凋(diao)亡诱导剂导致CI降低(di)至(zhi)零。虽然这个通用实(shi)例涉及细胞融合时的药物添(tian)加，基于阻抗的测定是非(fei)常灵活的，并且还可以评估初始细胞粘附(fu)到电极的速率和程度(du)，或细胞增殖的速率和程度(du)。

_{图(tu)3.用于(yu)建(jian)立和(he)运行凋(diao)亡测定的(de)通用实时阻抗曲线(xian)。 在(zai)文(wen)中(zhong)解释了(le)阻(zu)抗(kang)曲(qu)线(xian)的每个阶段及(ji)其产生(sheng)的蜂窝行为。}

上述通(tong)用(yong)示(shi)例(li)，图4显示了使(shi)用ACEA的xCELLigence实(shi)时单(dan)元分析（RTCA）仪器中的E-Plate板中采集的实际(ji)实时阻(zu)抗数据。 图(tu)4A显(xian)示将A549细胞添加到(dao)E-Plate板后的(de)(de)头(tou)两个小时的(de)(de)阻(zu)抗曲线(xian)，其(qi)中孔(kong)预先用不同浓度的(de)(de)胶(jiao)原IV包被。 虽然图4B显示了在将HeLa细(xi)胞暴露于(yu)GPCR激动剂(ji)多巴(ba)胺的最(zui)初几分(fen)钟内(nei)发生的细胞(bao)指(zhi)数的变化，图4C评估了在(zai)20小(xiao)时内NK细胞介导的癌细胞的细胞溶解(jie)。 图4D突出(chu)显示根据药物的(de)(de)作(zuo)用(yong)机制可能在细胞指(zhi)数中(zhong)发(fa)生的(de)(de)变(bian)化。

_{图4.使用E-Plate和xCELLigence RTCA仪器获得的(de)实(shi)时阻抗曲线的(de)示例。 （A）实时监测(ce)已经预先涂覆(fu)不(bu)同浓度胶原(yuan)IV的E-Plate孔的A549细胞(bao)粘附。请注意阻抗值（细胞(bao)指数(shu)）与显微(wei)镜中可(ke)见的贴壁细胞(bao)数(shu)之(zhi)间的相关性(xing)。 （B）暴露于不同(tong)浓度(du)GPCR激动剂多巴(ba)胺(an)的HeLa细胞的实(shi)时(shi)阻抗曲线。黑色箭(jian)头(tou)表示(shi)多巴胺加入的时(shi)间。 （C）用于NK细胞(bao)介导的(de)MCF7乳腺癌(ai)细胞溶解的实时阻抗(kang)曲线(xian)。 （D）暴露于药物的(de)A549细胞的实(shi)时阻抗(kang)曲(qu)线(xian)显示各种作用(yong)机制。}

与细(xi)胞相关的抵抗力(li)

RTCA提供细(xi)(xi)胞(bao)数量(liang)，增殖率，细(xi)(xi)胞(bao)大小(xiao)/形状和细胞 - 底物附着质量的定(ding)量读(du)数。由(you)于这些物理性(xing)质是数千种(zhong)不同基因(yin)/蛋白质的(de)产物(wu)，因此RTCA可以为(wei)细胞健康(kang)和行为(wei)提供(gong)非(fei)常广泛的(de)视野。在(zai)xCELLigence仪(yi)器上已经成功地(di)分析(xi)了从内皮(pi)屏障功能和趋化(hua)性到丝状伪足(zu)动力(li)学和免(mian)疫细胞(bao)介(jie)导的细胞(bao)溶解(jie)的一(yi)切。尽管它们的广泛性，xCELLigence测定仍然能够(gou)询(xun)问(wen)非常具体(ti)的生化和细胞现(xian)象。适当使用对照和/或正交技术使得可以(yi)将阻抗迹线的特征(zheng)与特定的细(xi)胞/分(fen)子现象相(xiang)关联。要(yao)了解(jie)如何做到这(zhei)一点，并且看到xCELLigence RTCA技术的敏感性和多功(gong)能性，请仔细阅读这里突出显示的许多具体应用